Espectrometría de Masas
Marta Vilaseca
Jefa de Unidad
Tel Oficina : +34 93 40 39815
correo-e : marta.vilaseca
irbbarcelona.org
Introducción
Fundada en septiembre de 2007, la Plataforma Científica de Espectrometría de Masas proporciona a la comunidad científica del IRB Barcelona y a investigadores de instituciones externas herramientas modernas de cromatografía y espectrometría de masas para la identificación y caracterización de un amplio espectro de especies biológicas.
La plataforma está equipada con espectrómetros de masas de alta precisión y resolución con técnicas de espectrometría de masas (MS) recientemente incorporadas como la espectrometría de movilidad de iones (IM) asociada a tándem de MS de alto rendimiento, la resonancia de MS de "Fourier Transform Ion Cyclotron Cell" con técnicas de fragmentación ECD (disociación de la captura de electrones) y la IRMPD (disociación de infrarrojos multifotón).
La plataforma desarrolla métodos para la identificación y caracterización de varias especies biológicas que abarcan desde pequeñas moléculas hasta grandes biomoléculas (ej. proteínas intactas). Las interacciones no covalentes entre proteína-proteína y ligando-proteína también se estudian por MS y IM/MS para profundizar en los mecanismos de acción de estas proteínas en procesos biológicos.
La identificación y cuantificación desde una aproximación de proteómica clásica se llevan a cabo en colaboración con la Plataforma de Proteómica del PCB.
La plataforma también ofrece servicios de consulta y de desarrollo de metodología analítica para aplicaciones específicas, así como procesamiento de los datos espectrométricos. Las muestras pueden ser analizadas directamente por el servicio o por los propios investigadores (previamente formados por miembros de la plataforma), que pueden utilizar los espectrómetros de masas a través de un sistema de acceso libre.
Para más información, contactar con la mánager de la plataforma:
marta.vilasecairbbarcelona.org
Más información
Espectrometría de Masas
Los servicios ofrecidos incluyen el análisis de MS, MS/MS y MSn utilizando técnicas de ionización a presión atmosférica (electrospray, nanoelectrospray y APcI) acopladas a LC, nanoLC o introducción directa.
Líneas de especialización:
- Análisis de proteínas intactas. “Top-down”. “Middle-down”.
- Análisis MS y IM-MS de complejos no covalentes.
- Análisis de digeridos peptídicos (MS, MS/MS) para identificación de proteínas y determinación de modificaciones post-traduccionales (PTMs). Proteómica clásica (“Bottom-up”) en coordinación con la Plataforma de Proteómica del PCB.
- Análisis de pequeñas moléculas para la determinación de la masa exacta.
La plataforma ofrece servicios de consulta y de desarrollo de métodos analíticos para aplicaciones específicas, así como procesamiento de los datos espectrométricos. Las muestras son analizadas directamente por el personal de la plataforma, o bien por los propios investigadores (previamente formados por el personal especialista), que pueden utilizar los espectrómetros de masas a través de un sistema de acceso libre.
Equipo y aplicaciones especializadas:
1-LTQ FT Ultra (Thermo Scientific. Espectrómetro de masas híbrido consistente en una trampa de iones lineal, combinado con un sistema de transformada de Fourier (FT) y una celda de resonancia ciclotrónica (ICR). También está provisto de ECD y IRMPD para la fragmentación complementaria de las proteínas en el espectrómetro de masas. Este instrumento se usa para llevar a cabo análisis MS de proteínas mediante estrategias ”Top-down” y ”Bottom-up”. En su configuración normal el espectrómetro trabaja acoplado a un sistema LC (Surveyor LC (Thermo)) y a una interfaz nanoESI basada en tecnología chip (Advion Triversa Nanomate).
2-Sistema MS de alta definición Synapt (Waters- Micromass). Instrumento híbrido QTOF con un Triwave Cell incorporado. Este instrumento permite combinar la espectrometría de masas en tándem con la movilidad de iones, permitiendo así el análisis de muestras, diferenciadas no sólo por su relación masa-carga, sino también por su forma y tamaño. El instrumento se utiliza para analizar la estructura macromolecular y la conformación de proteínas intactas y también para el estudio de interacciones no covalentes. Cuando funciona en su configuración normal, está unido a una interfaz nanoESI basada en chip (Advion Triversa Nanomate), combinando así el análisis de muestras en modo de infusión y por acoplamiento a nanoLC (NanoAcquity UPLC, Waters; comprado en 2009).
3-LCT-Premier XE (Waters-Micromass). Espectrómetro de masas de tiempo de vuelo (TOF) con aceleración ortogonal, ideal para el análisis de compuestos de elevado peso molecular. Este instrumento ha sido modificado para alcanzar condiciones inertes dentro de la fuente de ionización que permiten realizar experimentos de intercambio H/D en amida para el estudio de las propiedades dinámicas y estructurales de las proteínas y sus complejos. En otra configuración puesta a punto, se usa para analizar moléculas pequeñas para su caracterización estructural con precisiones de menos de 3ppm. Para purificaciones LC, normalmente está conectado a un dispositivo LC (UPLC Acquity, Waters).
Espectrometría de Masas
Antes de la entrega de muestras
Contacte con el equipo de MS y le aconsejaremos sobre la mejor metodología analítica para su aplicación específica.
Entrega/recepción de muestras
Hay dos formas de entregar muestras para análisis MS:
- Entrega al servicio técnico rellenando el formulario de solicitud (disponible aquí o en el laboratorio del MSC).
- Sistemas “self-service” (acceso abierto). Sólo para investigadores calificados y formados para operar los espectrómetros de masas.
Si planea utilizar el servicio de MS a menudo y quiere ser considerado para recibir formación, por favor contacte con la Dra. Marta Vilaseca.
Custodia y mantenimiento de muestras
Cuando rellene el formulario, su muestra o conjunto de muestras será identificada con un código numérico (aparte del correspondiente al usuario). En función del análisis requerido, se clasificará en la carpeta “para ejecutar” del instrumento correspondiente.
La muestra también se clasificará y mantendrá en las condiciones especificadas en el formulario.
Si lo prefiere, puede guardar su muestra y entregarla el día anterior al inicio del análisis (siguiendo las fechas establecidas).
Tiempo de respuesta para un análisis
Cada instrumento tiene asignado un calendario (contacte con el manager de la plataforma). Las muestras se ordenarán por fecha de entrada (los grupos del IRB Barcelona reciben un tratamiento preferente).
Dada la diversidad de aplicaciones -algunas sólo requieren un análisis rápido mientras que otras necesitan un mayor tiempo de análisis- el calendario se organizará como sigue:
- Los usuarios pueden reservar un instrumento específico durante una semana para una aplicación larga (máximo dos semanas completas por usuario, dependiendo de la demanda).
- Para evitar retrasos, entre aplicaciones largas siempre reservamos una semana para llevar a cabo análisis más cortos.
- Los lunes (o un día previamente especificado) están reservados para el mantenimiento del equipo y la puesta a punto de la técnica requerida esa semana para cada instrumento.
Entrega de resultados
Los resultados obtenidos por los técnicos especialistas del MSC serán entregados en formato impreso (espectros y un informe especificando las condiciones del análisis). También pueden guardarse datos en formato digital, si así se requiere.
Si se requiere un procesamiento posterior de los resultados, un ordenador de la plataforma se reservará para dicho proceso.
Nuestro objetivo futuro es que los usuarios también puedan acceder a los datos a través de una red de seguridad. Los datos serán transferidos a un servidor común y las copias de seguridad se realizarán automáticamente desde el Servicio de Tecnología de la Información (ITS). Los datos se guardarán durante un máximo de dos años.
Espectrometría de Masas
© Photos by Gianluca Battista/Massimiliano MinocriJefe de Unidad
Marta Vilaseca
tel +34 93 40 39815
e-mail: marta.vilasecairbbarcelona.org
Técnicos de Investigación Senior
Marina Gay
tel +34 93 40 39815
e-mail: marina.gayirbbarcelona.org
Técnicos de Investigación
Mª Del Mar Vilanova
tel +34 93 40 39815
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